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      拉薩GMP無菌實驗室的運行及管理

      admin 2020-04-30 05:49:01 閱讀


      GMP無菌實驗室的運行及管理

        一、室內環(huán)境管理(guǎn lǐ)
      無菌實驗室設有無菌操作間、緩沖間和更衣間,無菌操作間潔凈度達到10000級,超凈臺潔凈度達到100級且室內溫度應保持在20~24℃,濕度保持在45%~60%[1],此設置不僅滿足人體舒適度且又不利于室內微生物的生存。PCR實驗室結構和設施、安全操作規(guī)程、安全設備適用于對健康成年人已知無致病作用的微生物,如用于教學的普通微生物實驗室等。初效、中效過濾器需要6個月更換1次,高效過濾器需要每年更換1次,以保證室內潔凈度達到標準。紫外燈達到使用壽命(lifetime)會影響消毒滅菌的效果,應定期巡查更換,同時應加強其他指標的監(jiān)測,如潔凈度、細菌菌落數(shù)、靜壓差和風量等。

        二、物流管理
      經(jīng)過γ射線滅菌的細胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、離心管等用1000mg/L濃度的消毒液徹底擦拭器材表面,消毒后放置于傳遞窗中,紫外燈照射30min后方可帶入實驗室。PCR實驗室國家實驗室代表國家最高水平,是按國際一流標準建立的,規(guī)模非常大,基本包括本學科領域所有研究方向,而且人員配備上要求面向國內外招聘最優(yōu)秀的研究人員,直接參與國際競爭,往往是多學科交叉的創(chuàng)新平臺。高壓消毒的器材如止血鉗、治療盤、離心套管等要用包布包裹2層,經(jīng)高壓蒸汽滅菌和烤箱烘干后使用。使用前應檢查物品包裹內外各種監(jiān)測指示劑是否符合要求,再決定使用。貯存器材可放入無菌室的柜櫥內,若超過有效期應重新滅菌。進包裝間要嚴格洗手,穿工作衣、戴口罩、帽子,包裝前檢查包布、治療巾,應清潔干燥無破損,做到一用一洗一消毒,各類器材應光潔無銹、性能完好齊全。
      外用3M化學指示膠帶封貼并注明品名、包裝者、查對者、滅菌期及有效使用期,各類滅菌包包扎應松緊適度、整齊,減少各種感染的機會。所有實驗室器材需在最外層傳遞窗中用紫外燈照射30min后方可帶入緩沖間。滅菌包需在緩沖間內剝去最外層包布后方可帶入無菌操作間。在無菌操作間內剝去內層包布后擺放到固定(fixed)位置備用。實驗室內各種器材要排放有序,定期檢查,補充基數(shù)。為保證潔凈度,應嚴禁堆放雜物,以防污染。污敷料及垃圾廢液等應分別放入專用廢液缸和污物桶中,待操作完畢后移出實驗室。徹底清潔室內物品及地面,減少污物在室內的停留時間。

        對已污染或疑似污染培養(yǎng)基、細胞因子等應立即丟棄。動物(SPF級)實驗室每類生物安全防護實驗室根據(jù)所處理的微生物及其毒素的危害程度各分為四級。各級實驗室的生物安全防護要求依次為:一級最低,四級最高。實驗室設定了單獨的陽性工作區(qū)域,包括陽性無菌(意思:沒有活菌)操作間、緩沖間和更衣間。陽性工作區(qū)域與陰性工作區(qū)域完全隔離,防止肝炎病毒通過血液及相關物品等感染陰性患者回輸?shù)募毎?,防止患者通過細胞回輸感染乙肝病毒。工作人員進入陽性區(qū)域后,不得再進入陰性區(qū)域,陽性間每次使用的洗手衣需加入1000mg/L濃度消毒液,洗滌晾干以備下次使用,每次進入陽性間所著一次性隔離衣在用后應棄于陽性間垃圾袋中,陽性液體污物應瓶裝密封后放入陽性間醫(yī)療垃圾袋中。陽性醫(yī)療垃圾袋從陽性間的傳遞窗中傳出,放入專用醫(yī)療垃圾桶中,由院內專人負責回收。


        三、運行制度管理
      工作人員于每次實驗操作前30min打開實驗室空氣凈化系統(tǒng)和紫外燈。如果實驗室長期不用,需要在實驗前3h打開空氣凈化系統(tǒng),以提高空氣潔凈度。在潮濕季節(jié)使用時,打開紫外燈時間需適當延長,以加強消毒效果,保證實驗質量。進入無菌實驗室的人員要嚴格著裝,穿著經(jīng)嚴格高壓蒸汽滅菌過的洗手衣、隔離衣、口罩、帽子及用10g/L過氧乙酸溶液浸泡后晾干的拖鞋。著裝程序如下:進入第一更衣間后脫掉外衣?lián)Q一更拖鞋;隨即進入第二更衣間,穿戴經(jīng)高壓蒸汽滅菌的一次性口罩帽子,著洗手衣?lián)Q二更拖鞋,帶無菌橡膠手套;進入第三更衣間后著隔離服,換三更拖鞋,之后方可進入無菌操作間操作。
      保持實驗室相對密閉狀態(tài),嚴格控制人員進出,必要情況下需要工作人員互相溝通協(xié)調時,可通過房間對講電話聯(lián)絡,將工作人員出入次數(shù)降到最低,減少不必要的渦流形成,使室內的氣壓始終處于正壓狀態(tài)。各項操作要集中,操作過程要輕穩(wěn),不能在實驗室抖動衣物布類,以防止微粒在室間飛揚,保證室間空氣的潔凈。實驗室人員進入無菌(fungus)操作間應衣帽整潔、修剪指甲,嚴格執(zhí)行無菌技術操作。一切操作必須在百級凈化的超凈工作臺內進行,超凈工作臺在使用前需打開其紫外燈輻照滅菌30min以上,并同時打開超凈工作臺進行吹風。實驗中應保持無菌操作,拿取物品不要跨過無菌面;培養(yǎng)瓶不要過早打開,對于已開瓶口者要盡量避免垂直放置;吸管等不能觸及瓶口,以防細菌污染或細胞的交叉感染。每次操作過程中留取定量樣品進行細菌、真菌、支原體檢測(檢查并測試),以檢查無菌操作的可靠性及細胞是否污染。操作完畢后應及時清理無菌實驗室。組織實驗室全體人員進行理論學習,明確無菌實驗室工作原理、環(huán)境要求,設置嚴格的工作流程,明確分工并強化責任技師有效的合作配合意識。

        四、衛(wèi)生清潔管理
      清潔工作應在實驗室空氣凈化系統(tǒng)(system)運行中進行,清潔工具采用不掉纖維的織物材料制作。一切清潔工作必須采用濕式打掃,每周進行1次徹底清潔。需用1000mg/L含氯消毒液擦拭房間桌、椅、墻壁、天花板以及轉凳、顯微鏡等固定在實驗室內的物體。用體積分數(shù)為75%的酒精擦拭培養(yǎng)箱、超凈臺和紫外線燈管。地板很容易藏塵(如人體皮膚、毛發(fā)的脫落、布類的纖維等)、藏菌等,是室內的污染源,應在吸塵器吸除后用1000mg/L含氯消毒液擦拭。抽風、回風口也易藏塵、藏菌,應重點(zhòng diǎn)拆洗清潔,以確保塵埃過濾效果。衛(wèi)生清潔時應用10g/L過氧乙酸溶液浸泡消毒工作人員所穿的拖鞋,待晾干后再使用。每周進行徹底清潔時應將實驗室內物品如移液器、移液器槍頭、止血鉗、治療盤(蕁蕁上接第76頁蕁蕁)以及離心機套管等進行高壓蒸汽滅菌。清潔工作完成后,手術室凈化系統(tǒng)繼續(xù)運行時間一般不應少于30min。
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