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      樂山GMP無菌實驗室的運行及管理

      admin 2020-04-30 05:49:01 閱讀


      GMP無菌實驗室的運行及管理

        一、室內環(huán)境管理(guǎn lǐ)
      無菌實驗室設有無菌操作間、緩沖間和更衣間,無菌操作間潔凈度達到10000級,超凈臺潔凈度達到100級且室內溫度應保持在20~24℃,濕度保持在45%~60%[1],此設置不僅滿足人體舒適度且又不利于室內微生物的生存。PCR實驗室結構和設施、安全操作規(guī)程、安全設備適用于對健康成年人已知無致病作用的微生物,如用于教學的普通微生物實驗室等。初效、中效過濾器需要6個月更換1次,高效過濾器需要每年更換1次,以保證室內潔凈度達到標準。紫外燈達到使用壽命(lifetime)會影響消毒滅菌的效果,應定期巡查更換,同時應加強其他指標的監(jiān)測,如潔凈度、細菌菌落數、靜壓差和風量等。

        二、物流管理
      經過γ射線滅菌的細胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、離心管等用1000mg/L濃度的消毒液徹底擦拭器材表面,消毒后放置于傳遞窗中,紫外燈照射30min后方可帶入實驗室。PCR實驗室國家實驗室代表國家最高水平,是按國際一流標準建立的,規(guī)模非常大,基本包括本學科領域所有研究方向,而且人員配備上要求面向國內外招聘最優(yōu)秀的研究人員,直接參與國際競爭,往往是多學科交叉的創(chuàng)新平臺。高壓消毒的器材如止血鉗、治療盤、離心套管等要用包布包裹2層,經高壓蒸汽滅菌和烤箱烘干后使用。使用前應檢查物品包裹內外各種監(jiān)測指示劑是否符合要求,再決定使用。貯存器材可放入無菌室的柜櫥內,若超過有效期應重新滅菌。進包裝間要嚴格洗手,穿工作衣、戴口罩、帽子,包裝前檢查包布、治療巾,應清潔干燥無破損,做到一用一洗一消毒,各類器材應光潔無銹、性能完好齊全。
      外用3M化學指示膠帶封貼并注明品名、包裝者、查對者、滅菌期及有效使用期,各類滅菌包包扎應松緊適度、整齊,減少各種感染的機會。所有實驗室器材需在最外層傳遞窗中用紫外燈照射30min后方可帶入緩沖間。滅菌包需在緩沖間內剝去最外層包布后方可帶入無菌操作間。在無菌操作間內剝去內層包布后擺放到固定(fixed)位置備用。實驗室內各種器材要排放有序,定期檢查,補充基數。為保證潔凈度,應嚴禁堆放雜物,以防污染。污敷料及垃圾廢液等應分別放入專用廢液缸和污物桶中,待操作完畢后移出實驗室。徹底清潔室內物品及地面,減少污物在室內的停留時間。

        對已污染或疑似污染培養(yǎng)基、細胞因子等應立即丟棄。動物(SPF級)實驗室每類生物安全防護實驗室根據所處理的微生物及其毒素的危害程度各分為四級。各級實驗室的生物安全防護要求依次為:一級最低,四級最高。實驗室設定了單獨的陽性工作區(qū)域,包括陽性無菌(意思:沒有活菌)操作間、緩沖間和更衣間。陽性工作區(qū)域與陰性工作區(qū)域完全隔離,防止肝炎病毒通過血液及相關物品等感染陰性患者回輸的細胞,防止患者通過細胞回輸感染乙肝病毒。工作人員進入陽性區(qū)域后,不得再進入陰性區(qū)域,陽性間每次使用的洗手衣需加入1000mg/L濃度消毒液,洗滌晾干以備下次使用,每次進入陽性間所著一次性隔離衣在用后應棄于陽性間垃圾袋中,陽性液體污物應瓶裝密封后放入陽性間醫(yī)療垃圾袋中。陽性醫(yī)療垃圾袋從陽性間的傳遞窗中傳出,放入專用醫(yī)療垃圾桶中,由院內專人負責回收。


        三、運行制度管理
      工作人員于每次實驗操作前30min打開實驗室空氣凈化系統(tǒng)和紫外燈。如果實驗室長期不用,需要在實驗前3h打開空氣凈化系統(tǒng),以提高空氣潔凈度。在潮濕季節(jié)使用時,打開紫外燈時間需適當延長,以加強消毒效果,保證實驗質量。進入無菌實驗室的人員要嚴格著裝,穿著經嚴格高壓蒸汽滅菌過的洗手衣、隔離衣、口罩、帽子及用10g/L過氧乙酸溶液浸泡后晾干的拖鞋。著裝程序如下:進入第一更衣間后脫掉外衣?lián)Q一更拖鞋;隨即進入第二更衣間,穿戴經高壓蒸汽滅菌的一次性口罩帽子,著洗手衣?lián)Q二更拖鞋,帶無菌橡膠手套;進入第三更衣間后著隔離服,換三更拖鞋,之后方可進入無菌操作間操作。
      保持實驗室相對密閉狀態(tài),嚴格控制人員進出,必要情況下需要工作人員互相溝通協(xié)調時,可通過房間對講電話聯(lián)絡,將工作人員出入次數降到最低,減少不必要的渦流形成,使室內的氣壓始終處于正壓狀態(tài)。各項操作要集中,操作過程要輕穩(wěn),不能在實驗室抖動衣物布類,以防止微粒在室間飛揚,保證室間空氣的潔凈。實驗室人員進入無菌(fungus)操作間應衣帽整潔、修剪指甲,嚴格執(zhí)行無菌技術操作。一切操作必須在百級凈化的超凈工作臺內進行,超凈工作臺在使用前需打開其紫外燈輻照滅菌30min以上,并同時打開超凈工作臺進行吹風。實驗中應保持無菌操作,拿取物品不要跨過無菌面;培養(yǎng)瓶不要過早打開,對于已開瓶口者要盡量避免垂直放置;吸管等不能觸及瓶口,以防細菌污染或細胞的交叉感染。每次操作過程中留取定量樣品進行細菌、真菌、支原體檢測(檢查并測試),以檢查無菌操作的可靠性及細胞是否污染。操作完畢后應及時清理無菌實驗室。組織實驗室全體人員進行理論學習,明確無菌實驗室工作原理、環(huán)境要求,設置嚴格的工作流程,明確分工并強化責任技師有效的合作配合意識。

        四、衛(wèi)生清潔管理
      清潔工作應在實驗室空氣凈化系統(tǒng)(system)運行中進行,清潔工具采用不掉纖維的織物材料制作。一切清潔工作必須采用濕式打掃,每周進行1次徹底清潔。需用1000mg/L含氯消毒液擦拭房間桌、椅、墻壁、天花板以及轉凳、顯微鏡等固定在實驗室內的物體。用體積分數為75%的酒精擦拭培養(yǎng)箱、超凈臺和紫外線燈管。地板很容易藏塵(如人體皮膚、毛發(fā)的脫落、布類的纖維等)、藏菌等,是室內的污染源,應在吸塵器吸除后用1000mg/L含氯消毒液擦拭。抽風、回風口也易藏塵、藏菌,應重點(zhòng diǎn)拆洗清潔,以確保塵埃過濾效果。衛(wèi)生清潔時應用10g/L過氧乙酸溶液浸泡消毒工作人員所穿的拖鞋,待晾干后再使用。每周進行徹底清潔時應將實驗室內物品如移液器、移液器槍頭、止血鉗、治療盤(蕁蕁上接第76頁蕁蕁)以及離心機套管等進行高壓蒸汽滅菌。清潔工作完成后,手術室凈化系統(tǒng)繼續(xù)運行時間一般不應少于30min。
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